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什么是流式细胞仪?
流式细胞仪是一种用于执行称为流式细胞术的测量方法的设备。
该测量涉及将激光束照射到流动液体样品中的细胞上,检测细胞发出的散射光和荧光,并测量细胞大小、数量以及细胞内和表面抗原等特征。
流式细胞仪与荧光显微镜相比具有优势,例如能够同时定量多个测量项目,分析速度快。另一方面,流式细胞仪不适合观察细胞的形态特征。
流式细胞仪的使用
流式细胞仪广泛应用于涉及细胞、临床测试和**的生物和医学研究。可以测量多种类型的细胞。我们分析外周血白细胞以进行**诊断,并分析稀有细胞,例如培养的动物细胞、植物细胞、成体干细胞和肿瘤起始细胞,以对其进行表征。
其他测量对象包括微生物、浮游生物等海洋生物、精子、酵母和乳胶珠。
流式细胞仪原理
流式细胞仪主要由流路系统、光学系统和电气系统三部分组成。流道系统具有吸入样品并将其流入流通池的功能,流通池被来自光学系统的激光照射,该光学系统由光源、透镜、滤光片和产生光电流的检测器组成。
然后,该系统检测细胞发出的荧光,并使用电气系统对其进行分析。流路系统由管道、阀门和泵组成,用于将样品中漂浮的荧光标记细胞排列在一条线上进行分析。
当激光穿过细胞的被称为询问点的部分时,光被散射,同时通过激发与细胞结合的荧光染料而发射荧光,并且该散射光和荧光被装置检测。它作为一个信号。散射光有两种类型:前向散射光信号(FS)和侧向散射光信号(SS)。
使用不同的检测器检测FS和SS,FS反映细胞大小,SS反映细胞内结构。检测到的信号在电子系统中转换成数据,*终可以由软件解释。
其他流式细胞仪信息
1.分析仪和细胞分选仪
流式细胞仪分为两种类型:细胞分析仪和细胞分选仪。细胞分析仪是分析细胞的设备。包裹在鞘液中的样品液中的细胞通过流通池一一排列并流过检测部分。在那里照射激光,通过检测光散射和荧光来分析细胞。
细胞分析仪专注于分析,因此简单易用。除了细胞分析之外,细胞分选仪还可以分选出所需的细胞。除了分析细胞结构、大小和比例之外,还可以检查细胞分布并对细胞进行高速分类。
待分选的目标细胞被赋予正电荷或负电荷,并形成液滴。只有带电的目标细胞液滴被施加电压的偏光板转移并收集到试管或微管中。细胞分选仪的操作比细胞分析仪更复杂,并且需要更多的技能。
2. 流式细胞仪用抗体
流式细胞术中使用的细胞检测抗体包括多克隆抗体和单克隆抗体。多克隆抗体是从用抗原**动物后收集的血清中纯化的抗体。该抗体是识别并结合多个表位(抗体结合部分)的抗体混合物。
为了生产单克隆抗体,需要给动物提供抗原并进行**,然后携带抗体的 B 细胞与骨髓瘤(癌细胞)融合。从所得杂交瘤中分泌的抗体是单克隆抗体。该抗体仅识别一个表位。
从提高实验准确性和目标物质(抗原)检测的特异性的角度来看,流式细胞术用的抗体大多是单克隆抗体。